ゲノム改変技術
B-3. DNA切断ドメインの改良、および１塩基置換基盤技術の開発
広島大学・山本 卓
tybighiroshima-u.ac.jp
技術概要
FokIよりも高い機能性を有する新規ヌクレアーゼ（FirmCutヌクレアーゼ）を開発
最終目標：FirmCutヌクレアーゼを植物ゲノム編集に応用し、高機能バイオ化合物の生産性向上に資する。
成果
FirmCutヌクレアーゼの高い柔軟性と高い切断活性
5bpや7bpのスペーサー長でも、FirmCutヌクレアーゼの一種であるND1は活性を保持（図1・赤矢印）
ND1・ND2によるゲノム変異率の上昇（図2）
意義：FirmCutヌクレアーゼの植物ゲノム編集への応用。
概要
代表的なDNA切断エフェクタードメインとして汎用されているFokIよりも高い機能性（高い切断活性、種々の標的配列に対する高い柔軟性など）を有する新規ヌクレアーゼ"FirmCutヌクレアーゼ"を開発（特許出願済み）。
技術の優位性
- FokIベースのゲノム編集ツールの高機能化
- 核酸を使用しないゲノム改変が可能
- PPR等の国産ゲノム編集モジュールに適用可能
実用に向けた課題
- 有用性の実証（実用植物に適用）
- 実用化に適した改良
提供できる技術
- FirmCutヌクレアーゼを有するゲノム編集ツール
補足
- Firm Cutヌクレアーゼと融合させるDNA結合ドメイン（ZF、TALE、PPR等）が別途必要